单细胞转录组测序-产品介绍-诺禾致源

单细胞转录组测序

单细胞转录组测序—基于Smart扩增技术分析细胞转录组

单细胞转录组测序（Single cell RNA sequencing）是在单个至数百个细胞水平对mRNA进行高通量测序的一项技术，针对单个至数百个细胞研究其整体水平的基因表达情况，成功解决细胞分子机制研究中常见的细胞量少而无法进行常规高通量测序等难题。

高效，精准，无忧
单细胞转录组测序技术主要用于在全基因组范围内挖掘基因调控网络，尤其适用于存在高度异质性的干细胞、肿瘤细胞及胚胎发育早期
的细胞群体。单细胞转录组分析有助于深入理解细胞分化、细胞重编程及转分化等过程及相关的基因调控网络。

应用方向

诺禾优势

信息分析

诺禾致源单细胞转录组测序项目，不仅包括基因的结构和基因表达水平的分析，还包括差异基因功能注释。此外，诺禾致源提供个性化分析的服务，可以根据客户需求定制分析内容。

基因结构水平分析	基因表达水平分析
数据质控参考基因组比对新转录本预测基因结构优化可变剪切事件分类可变剪切数量统计变异检测SNP/InDel分析	数据质量评估基因表达水平分析差异基因表达水平分析差异基因GO/KEGG富集分析差异基因蛋白互作网络分析 RNA-seq整体质量评估可视化结果展示

送样建议

组织类型	送样建议
新鲜动物细胞*	1-1000个
Total RNA	＞10 pg

*细胞分离后置于单细胞转录组裂解液中，干冰运输送样

常见问题

1. 染色、FFPE等处理过的细胞是否能够进行单细胞转录组测序？
- 单细胞转录组测序的精确性受到RNA完整性的严格制约，同时，单细胞转录组测序无法观测到所有的基因，因此确保单细胞内RNA的完整性是分离单细胞、预处理的重心。分离后立即冰冻或新鲜组织的细胞能够最大程度保存RNA完整性，而经过染色、FFPE、PFA固定或其他甲醛、丙酮等固定方法均会使组织中所提RNA的获得率有显著下降，影响后续测序分析，因此单细胞转录组测序只针对新鲜单细胞。

2. 细胞可以不用不含Mg ²⁺和Ca ²⁺的1×PBS溶液清洗，直接在原培养液中吸取样本吗？
- 只要培养液中不含对cDNA具有抑制作用的成分，就可以直接吸取细胞样本。

4. 样品取出后有规定在多少天之内送到公司吗？送之前是直接保存在-80℃的冰箱中吗？还需要其他处理吗？
- 分离后的细胞立即放入裂解液中，装在裂解液中的样品可在-80℃保存至多三个月，干冰保存送样即可。

5. 扩增是用什么方法呢？阴性对照和阳性对照是自己准备吗？
- 我们公司扩增用的是Clontech的SMARTer试剂盒，试剂盒中自带阳性对照样品，不需要老师准备对照样品。

6. 多聚甲醛固定细胞后做单细胞转录组，会对细胞有什么影响？是会使RNA降解还是会影响扩增？还是其他原因？
- 多聚甲醛（4%）固定主要是可以使细胞内所有蛋白变形，固定住细胞当时的状态，防止蛋白（酶类）对DNA和RNA的影响，多用于流式细胞分析分选、RNA分子原位杂交、免疫组化免疫染色等分析前固定细胞使用。虽然理论上多聚甲醛可以抑制酶活，但使用后也同样影响RNA的完整程度，从而可能影响扩增效果。