二代建库测序服务-诺禾致源-高通量下一代测序

二代建库测序服务

二代建库测序—短周期、高质量

建库测序产品是以自动化建库平台、自动化质控流程和高性能的计算平台为技术依托，对合作伙伴提供的合格样品进行建库并运用 illumina 测序平台测序，或者对合作伙伴提供的合格文库直接进行测序，产出高质量的测序数据提供给客户进行生物信息学分析。

诺禾优势

1. 多元化精准的产品类型

DNA文库	RNA文库	PCR-free文库	自建库
非常规小片段文库宏基因组文库人外显子文库人重测序文库全基因组DNA甲基化文库 ChIP-seq文库 RAD文库	普通转录组文库链特异性转录组文库原核链特异性文库宏转录组文库 lncRNA文库 sRNA文库 circRNA	扩增子文库 PCR产物文库基因组PCR-free文库	自建库散样自建库包lane 自建库包flow cell

2.全方位详尽的测序策略

4.高质量的数据产出

诺禾致源建库测序平台获得 illumina 颁发的 CSPro 资质证书，并成为 illumina 在中国大陆的 IGN 人重测序服务商。我们承诺的测序数据指标均高于 illumina 官方标准，可在测序服务合同中体现。

5.极速的项目周期
诺禾致源依托柔性智能交付平台 Falcon ，满足四大产品类型（WGS、WES、RNAseq、建库测序产品）共线并行的交付，极大的提高了产品交付周期和数据质量。

送样建议

文库类型	DNA小片段文库	人外显子、目标区域捕获	PCR-free	RAD-Seq	GBS-Seq	甲基化	RRBS	扩增子	宏基因组
文库类型	二代DNA文库类型
植物组织	≥0.5g	-	≥3g	≥1g	≥0.5g	≥2g	≥2g	≥0.5g	-
动物组织	≥0.3g	≥0.5g	≥1.5g	≥0.5g	≥0.5g	≥1g	≥1g	≥0.3g	-
细胞	≥5×10 ⁶个	≥5×10 ⁷个	≥5×10 ⁸个	≥5×10 ⁷个	≥5×10 ⁷个	≥5×10 ⁸个	≥5×10 ⁸个	-	-
动物血液（哺乳类）	≥1mL	≥1mL	≥5mL	≥1mL	≥1mL	≥2mL	≥3mL	≥1mL	-
动物血液（红细胞有核类）	≥0.5mL	≥0.5mL	≥3mL	≥0.5mL	≥0.5mL	≥1mL	≥2mL	≥0.5mL	-
唾液	≥4mL	≥4mL	≥10mL	-	-	-	≥10mL	≥4mL	-
菌液（对数生长期）	>4mL	-	≥0.5g	-	-	-	-	≥0.5g	-
菌体	对应菌液离心，可见明显沉淀	-	≥5mL 菌液离心	-	-	-	-	≥4mL 菌液离心	-
土壤	-	-	≥3mL （离心管刻度）	-	-	-	-	≥2mL （离心管刻度）	≥5mL （离心管刻度）
粪便、肠道内容物、食糜	≥1mL（离心管刻度）	-	≥2mL （离心管刻度）	-	-	-	-	≥1mL （离心管刻度）	粪便、肠道内容物≥2mL；食糜≥4mL（离心管刻度）
瘤胃液	≥2mL	-	≥2mL	-	-	-	-	≥2mL	≥2mL
水体（滤膜）	直径4cm，滤膜3张	-	直径4cm，滤膜3张	-	-	-	-	直径4cm，滤膜3张	直径4cm，滤膜3张
FFPE	厚度在5-10μm，含组织面积大于25mm2的切片6张	-	-	-	-	-	-	-	-
拭子	≥4个	≥4个	≥10个	-	-	-	-	≥4个	≥5-10个
毛发	≥20根	≥20根	-	-	-	-	-	-	-

样本类型	普通转录组/DGE			LncRNA	宏转录组文库	原核链特文库	smallRNA	circRNA	备注
样本类型	二代RNA文库类型
新鲜植物组织干重	≥0.3g	≥0.3g	≥0.3g	≥0.8g	-	-	≥0.8g	≥1g	成熟部位例如植物茎、根、种子等建议2倍以上送样
新鲜动物组织干重	≥0.2g	≥0.2g	≥0.2g	≥0.5g	-	-	≥0.5g	≥0.8g	核酸不丰富部位例如脂肪、成熟皮肤、骨头等建议酌情增加送样量
新鲜培养细胞	≥2×10 ⁶个	≥2×10 ⁶个	≥2×10 ⁶个	≥10 ⁷个	-	-	≥10 ⁷个	≥5×10 ⁷个	-
新采集的全血（加入Trizol）	≥5ml（全血：Trizol=1:3）	≥5ml（全血：Trizol=1:3）	≥5ml（全血：Trizol=1:3）	≥8mL	-	-	≥8mL	≥10mL	-
PAXgene采血管	≥2管	≥2管	≥2管	≥3管	-	-	≥3mL	≥5mL	-
血清/血浆/细胞上清液/胸腔积液/脑脊液	-	-	-	≥20mL	≥20mL	≥20mL	≥20mL	-	-
唾液	-	-	-	≥5mL	≥5mL	≥5mL	≥5mL	-	-
石蜡切片	厚度在5-10μm，含组织面积大于25mm2的切片12张	厚度在5-10μm，含组织面积大于25mm2的切片12张	-	-	-	-	-	-	-
粪便样本	-	-	-	-	≥1g	≥1g	-	-	-
菌体	≥2×10 ⁶个	≥2×10 ⁶个	≥2×10 ⁶个	≥10 ⁷个	-	-	≥10 ⁷个	≥5×10 ⁷个	-
菌体	≥0.2g	≥0.2g	≥0.5g	≥0.5g	≥0.5g	≥0.5g	≥0.5g	≥0.8g	-
半固体细菌	≥0.5mL	≥0.5mL	-	-	-	-	-	-	-

常见问题

1. 二代测序错误率为什么开始和末期会升高？
- （1）测序错误率用E表示，碱基质量值用Q表示，Qphred=-10log10（e）Q30/Q20对应碱基正确率99.9%和99%。
  （2）一般测序片段前段几个bp以及片段末端的错误率会偏高；测序错误率会随片段长度增加而升高，这是由于化学试剂消耗造成的，是Illumina平台的共有特征。（非常规片段文库测序质量Q20、Q30会降低一些）。

2. 文库产出均一性指什么
- 测序时，同一条lane中的文库，产出数据量与文库加入量保持均一。例如混5个库，共得到50G数据，不会出现某一文库数据量30G而另一文库数据量只有5G的现象，要均等的每个库为10G。

3. 基因组污染对RNA测序的影响？
- 基因组污染会影响RNA的准确定量，会对后期建库及库容的计算造成影响；其次如果磁珠富集过后的RNA还存在基因组污染，会在后续的RNA建库过程中引入基因组的数据，对后续的分析产生影响。可通过DNA酶消化去除，或PCR后切胶。

4. 文库库检出现接头污染/含小片段如何处理？
- 对于接头污染或引物二聚体污染可用磁珠纯化加以处理，而小片段文库只能切胶纯化，纯化效率一般在30%左右，风险比较高。

拓展材料

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