宏转录组测序送样建议-诺禾致源

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宏转录组测序

1. 送样建议
2. 注意事项
3. 打包及寄送建议
- 3.1 样本的打包
- 3.2 样本的名称标识

声明：
实验室不接收《人间传染的病原微生物名录》（点击查看）的所有样品。对于高毒性动植物等样品，必须事先通过销售、客服或运营经理与诺禾致源技术人员联系，确定无高致病性和传染性后才能寄送样品。
提取风险提示和注意事项：核酸提取质量与物种及组织部位、采集方法及保存状态、提取方法及操作、实验器材及环境等因素均有密不可分的联系，尤其是三代超长提取对样本的要求更高。组织提取时可能受到上下游处理操作的影响，因此较难保证单次提取满足质量要求，客户应在寄送组织样品前进行备份。为了保障获得高质量的核酸，请务必按照送样手册所规定的准备样本。对珍贵样本或者微量样本，建议自行提取。取样过程中，需要全程佩戴手套，并且使用预冷乙醇对取样器材进行擦拭消毒，以免样本污染

1. 送样建议

1.1 组织类样本

样本类型	送样量	样本保存和运输	注意事项
新鲜动物组织	≥500mg	将组织放入旋盖冻存管中密封好，迅速置于液氮中速冻，-80℃保存，干冰运输	取相应部位组织，尽量将组织切成1cm²左右的小组织块
新鲜植物组织	≥800mg	将组织放入旋盖冻存管中密封好，迅速置于液氮中速冻，-80℃保存，干冰运输	取相应部位组织，尽量将组织切成1cm²左右的小组织块

1.2 粪便类样本

样本类型	送样量	样本保存和运输	注意事项
粪便	≥1g，建议3g	将挖取的粪便放入采样管中，密封好，液氮速冻，-80℃保存，干冰运输	受试者尽量避免有疾病（肠道炎症、癌症等）史，避免有手术等医疗干预
粪便样本处理方法：（1）用采样管中无菌勺挖去粪便中段（基本不接触空气等其他媒介）的部分（3-5g），小鼠粪便至少在3-5粒；

1.3 其他样本

样本类型	送样量
total RNA	浓度：≥ 50ng/μL 体积：20μL ≤ V ≤ 120μL 总量：≥ 1μg
菌体/菌丝	≥ 1*10⁷ 个 ≥ 0.5
肠道内容物	0.5-1g
活性污泥/淤泥/沉积物类	10-15mL（约4-5g沉降物）
土壤	≥ 2g（建议富集菌体沉淀)
肠道内容物类处理方法：（1）实验对象死亡后，无菌解剖刀于无菌环境中取出整个肠道，选择切取所需肠段（如回肠、结肠、盲肠等）；（2）无菌手术刀挖取内容物置于无菌离心管中，液氮速冻至少4h以上，后与-80℃保存，干冰运输。注意：一般单个样本500-1000mg/管内容物。为保证实验顺利进行，尽可能多采集保存样品。
活性污泥/淤泥/沉积物类（需自行提取）： 1）从活性污泥装置中取至少10-15ml的活性污泥样本（约4-5g沉降物）；或者取距离水底/地表0-10cm的沉积物约5-10g； 2）保存在无菌离心管中，液氮速冻并放置于-80℃保存。 3）RNA提取。液氮速冻，干冰送样。
土壤（需自行提取）：（1）土壤样本低温环境（2-8℃）运送至实验室，先2mm筛网过筛，取5-10g保存于无菌离心管中，用RNAlater浸泡，保证全部浸泡在RNAlater中，4℃过夜孵育，随后高速离心去除RNAlater，-80℃保存；（2）土壤样本细菌含量比较低，或含有大块砂石，可先加入无核酸酶的生理盐水或1×PBS，匀浆，自然沉降或低速离心（≤100g，1-2min），吸取上层浑浊液体，放入新的1.5ml或2ml离心管，高速离心（≥8000g10min）弃上清，取沉淀后，再用RNAlater处理。（3）沙质土壤，建议2-8℃（冰袋）寄送，并标明处理前4℃冰箱存放，由实验室进行处理。（4）提取RNA，液氮速冻，-80℃保存，干冰送样。注意：样本准备过程中所用的离心管必须是无菌无RNA酶的离心管；送样用到RNAlater，务必注明是RNAlater保存的，尽量不要冻结，4℃过夜后，需高速离心去除RNAlater才可冷冻；RNAlater使用量：500mg土壤加1-1.5mlRNAlater，充分混匀。
病毒液送样建议：宏病毒组可接的样本类型主要为病毒样本；有传染性或者是未知传染性、对人体有害的病毒不接（参考病原微生物实录）；另外病毒液需要送提取好的RNA。样本均液氮速冻，-80℃保存。

2. 注意事项

（1）宿主类、环境类样本建议至少10G数据量；粪便类5G数据量；
（2）建议送新鲜样本；选取微生物含量较多的部分送样；
（3）务必明确做宏转录组分析还是病毒组分析；
（4）送样前备注样本类型、物种、部位、样本量、保存时间；
（5）组织类样本切记不可反复冻融。反复冻融样本不建议送样；样本存放时间：-80℃不超过3个月；
（6）发酵类请富集菌体后送菌体沉淀；
（7）陈皮等类似样本无法做宏转录组。

3 样本打包及寄送建议

3.1 样本的打包
（1）核酸样品建议使用质量好的1.5ml或2ml 低吸附EP管装载样品，并用封口膜封口。为了防止样品管破裂，或者污染和混乱，请不要使用诸如PCR管、0.5ml EP管、八联管、96孔板、深孔板等非标准管送样。非标准管不利于样品保存以及后续实验的进行。如有样品使用非标准管制备，还请在送样前自行转管处理。
（2）组织样本建议根据送样量使用合适规格带螺纹帽的EP管、冻存管或者离心管装载组织样品，并用封口膜封口。
（3）为防止样品管在运输过程中受到干冰挤压破裂，最好将样品管放到50ml离心管或其他支撑物中，并在支撑物里添加棉花或卫生纸缓冲。大量样品建议将EP管放置在冻存盒中，并在冻存盒外面包裹气泡垫。如使用锡箔纸、自封袋装载的样品，为防止运输中受挤压破损，建议将锡箔纸折叠整齐装在自封袋中，在样品包装外再用气泡垫包好并固定。
（4）对于血液样品，建议采用5-10ml 塑料抗凝采血管装载，为了防止运输过程中采血管因挤压而损坏，需要将每支采血管管身均用气泡垫包好，然后放置到塑料或纸质包装盒中。
（5）用乙醇沉淀的样品由于运输中会有少量乙醇挥发出，建议将样品管盖用封口膜缠绕4-5圈。
（6）为便于处理和保存，组织样品送样量请不要超过建议送样量的5倍（特殊的得率较低的样品除外）。
3.2 样本的名称标识
（1）所有的样品必须具有清晰的标记，并且简洁明了。
（2）使用锡箔纸包装的组织样品建议在锡箔纸内外均标记样品名称，并将锡箔纸放在自封袋中，自封袋外面再标记上样品名称，防止锡箔纸上样品名称模糊引起样品混乱。
（3）使用乙醇沉淀的核酸样品，由于挥发出的乙醇会使记号笔的标记模糊，建议用油性记号笔将样品名称写在标签纸上，然后用透明胶带将标签纸粘贴在样品管壁上，并缠绕2-3圈。
（4）样品名称建议使用“字母+数字”命名方式标注在管盖。其他信息如日期、浓度、物种等可标注在管壁。所有标注内容需与《样品信息单》保持一致。